產(chǎn)品描述
　　PikoOrange Protein Quantitation Kit是一個(gè)高度敏感的基于熒光技術(shù)定量純化蛋白質(zhì)的試劑盒，其檢測(cè)蛋白濃度范圍為0.1~10 μg/ml。比起傳統(tǒng)定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳，此外，與NanoOrange蛋白質(zhì)定量測(cè)定技術(shù)相比具有更好的的線(xiàn)性和重現(xiàn)性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質(zhì)之間的小變異性，且熒光信號(hào)穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)16 h；其受測(cè)樣本不論為純化蛋白或抗體皆適用。需特別注意的是，PikoOrange對(duì)鹽類(lèi)、緩沖液、去垢劑或是其他化學(xué)物質(zhì)都有不同程度的耐受性（表1）。
產(chǎn)品信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存
常溫運(yùn)輸。組分A常溫保存；組分B常溫避光保存；組分C  4℃ 保存。有效期36個(gè)月。
【注】：如果緩沖液出現(xiàn)沉淀，可加熱到37℃并漩渦溶解。
使用方法

1. 制備1x PikoOrange緩沖液: 1:10 稀釋10x緩沖液在dH₂O。例如，添加1 mL10x 緩沖液至9 mL dH₂O。 PikoOrange緩沖液可以?xún)?chǔ)存在室溫下。

2. 使用前準(zhǔn)備PikoOrange工作液：將200xPikoOrange染料按1:200用1x PikoOrange緩沖液稀釋。例如，添加25 μL 500x PikoOrange染料至5 mL 1x PikoOrange緩沖液。
   注意：您將需要大約3 mL工作液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（見(jiàn)表2)以及每孔檢測(cè)樣品250 μL工作液。

3. 準(zhǔn)備未知樣本：10 μL 樣本添加 250 μL PikoOrange工作液。
   注意：您可能需要稀釋未知樣本以得到不同濃度的樣本。樣品稀釋可能會(huì)減少干擾物質(zhì)的影響。

4. 準(zhǔn)備一個(gè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)所需的BSA濃度，如表2所示。

5. 樣本和標(biāo)準(zhǔn)蛋白加熱至90~ 95℃ 10分鐘，此過(guò)程需避光操作。

6. 取出樣本室溫避光放置20 min冷卻。短時(shí)間離心收集全部樣本。

7. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品或未知樣品取200 μL轉(zhuǎn)移到96孔酶標(biāo)板，熒光酶標(biāo)儀讀數(shù)。激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為480/598 nm。
   【注】：樣品可以被轉(zhuǎn)移到熒光試管使用熒光儀測(cè)量。如果需要超過(guò)200 μL體積測(cè)量，等比例放大配置方案。
   
   表1：PikoOrange對(duì)不同化學(xué)物質(zhì)的耐受性

表2：準(zhǔn)備BSA樣品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

	BSA體積		工作液體積	BSA 終濃度（μg/mL）
A	5 μL BSA std (2 mg/mL)		995 μL	10
B	250 μL solution A		250 μL	5
C	250 μL solution B		250 μL	2.5
D	200 μL solution C		300 μL	1
E	250 μL solution D		250 μL	0.5
F	250 μL solution E		250 μL	0.25
G	100 μL solution F		150 μL	0.1
H	0 μL solution G		250 μL	0
圖1：PikoOrange比NanoOrange有更好的線(xiàn)性和重現(xiàn)性

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