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簡要描述：Pikogreen dsDNA定量試劑盒（超敏）不同于常規(guī)的基于吸光度的測量，這款試劑盒可以區(qū)分dsDNA、ssDNA或RNA，有選擇性地檢測dsDNA（見圖1）。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比，該產(chǎn)品具有檢測范圍廣、高靈敏度、高特異性等優(yōu)點(diǎn)。
產(chǎn)品型號(hào)：AN54L038/AN54L039廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時(shí)間：2024-08-06訪 問 量：2505相關(guān)文章
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| 品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | AN54L038/AN54L039 |
|---|---|---|---|
| 規(guī)格 | 200 assays | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
| Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏) | AN54L038 | 200 assays |
| Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏) | AN54L039 | 1000 assays |
產(chǎn)品組分
| 組分 | AN54L038 | AN54L039 |
| A: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Solution | 50 mL | 250 mL |
| B: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Enhancer, 100× | 0.5 mL | 2.5 mL |
| C: dsDNA Standards 0 , 0.5, 1, 2 ,4 ,6, 8 and 10 ng/uL dsDNA from calf thymus | 每組 0.1 mL（8組） | 每組 0.5 mL（8組） |
運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃避光保存，有效期24個(gè)月。
使用方法
使用前，將產(chǎn)品從儲(chǔ)存條件下取出恢復(fù)至室溫。如果100XEnchancer儲(chǔ)存液出現(xiàn)沉淀，可37℃水浴溶解。每個(gè)組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻、離心，以免造成不必要的試劑損耗。
每個(gè)待測樣品對應(yīng)200 μL的Pikogreen工作液。對于一個(gè)96孔板，吸取200 μL 100X Enchancer，加入到20 mL Quantitation Solution 中，渦旋混勻，配置成Pikogreen工作液，為得到最佳結(jié)果，工作液應(yīng)在1 h內(nèi)使用完畢。如果將工作液重新儲(chǔ)存并在24 h內(nèi)使用，結(jié)果的準(zhǔn)確性會(huì)有輕微損失。儲(chǔ)存過程中，增強(qiáng)液可能會(huì)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，可以通過渦旋震蕩使其重懸。
對于每個(gè)樣品，吸取200 μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果精確可靠，建議每個(gè)測試樣品和DNA標(biāo)樣分別做平行的3個(gè)復(fù)孔，此過程也可以使用有精確量程的移液排槍進(jìn)行。黑色的檢測板可以減少各測試樣品間的熒光干擾。
在96孔板微孔中，每孔加入10 μL的dsDNA標(biāo)樣或未知樣品，并用移液器輕輕混勻。
將微孔板室溫避光孵育5~10 min，為得到最佳結(jié)果，孵育結(jié)束后，應(yīng)立即讀取檢測板。也可以在6 h內(nèi)讀取數(shù)據(jù)，但結(jié)果的精確性會(huì)有輕微損失。
使用激發(fā)波長和發(fā)射波長在485 nm和530 nm處的酶標(biāo)儀測量熒光值。
制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算檢測樣品的DNA濃度（見圖2）。
【注】：圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考，您可以根據(jù)實(shí)際測得的數(shù)據(jù)自制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而求算樣品的濃度。
圖1：使用Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒檢測不同類型核酸得到的相對熒光強(qiáng)度 |
圖2：使用Pikogreen Hig Sensitivity dsDNA 定量試劑盒制作的calf thymus DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線（Ex/Em 485/530），左上角插圖顯示了低濃度DNA樣本測定的曲線圖。 |
注意事項(xiàng)
對于要檢測的植物或動(dòng)物來源的DNA樣本，小牛胸腺DNA（Calf thymus DNA ）常常作為制作DNA標(biāo)樣的參照物。因?yàn)?/span>Calf thymus DNA具有雙鏈結(jié)構(gòu)、高度聚合，堿基分配均勻（AT含量58%，GC42%）。如果檢測樣品的熒光值超過了標(biāo)準(zhǔn)曲線，那么需要將樣品做進(jìn)一步稀釋處理。為了保持結(jié)果的一致性，務(wù)必使每孔上樣量均等，且不含有其他高濃度的污染物。
2. Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒可以測量范圍在0.2~100 ng的dsDNA。對于一些不需要線性檢測的樣品，試劑盒檢測范圍可以擴(kuò)展至200 ng。如需檢測更低含量的樣品，您可以將DNA標(biāo)樣用1×TE緩沖液作進(jìn)一步的稀釋，濃度可以稀釋到0.02 ng/μL，然后按照常規(guī)程序每孔10 μL上樣。
3. 對于不同種類的檢測儀器，您可以優(yōu)化儀器設(shè)置，以獲取最佳線性度。一些可能會(huì)影響最終線性度和相對熒光強(qiáng)度的因素有：（1）激發(fā)和發(fā)射波長與帶寬（2）截止型濾波器（3）靈敏度設(shè)置（4）移液的準(zhǔn)確性（5）微孔板制造商。為了得到最佳結(jié)果，請使用精確校準(zhǔn)的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測板。建議檢測時(shí)每個(gè)DNA標(biāo)樣和未知樣品都設(shè)定3個(gè)復(fù)孔。如果檢測時(shí)不只一塊96孔板，建議每塊96孔板都設(shè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量減少檢測板之間的誤差。
表1：常見的DNA污染物對 Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒的影響
| 復(fù)合物 | 初始濃度 | 終濃度（200 μL） | 結(jié)果 |
| 醋酸銨 | 100 mM | 5 mM | Pass |
| 醋酸鈉 | 600 mM | 30 mM | Pass |
| 氯化鈉 | 200 mM | 10 mM | Pass |
| 氯化鎂 | 25 mM | 1.25 mM | Pass |
| 苯* | 2 % | 0.1 % | Pass |
| 乙醇 | 10 % | 0.5 % | Pass |
| 氯仿 | 2 % | 0.1 % | Pass |
| 十二烷基硫酸鈉（SDS） | 0.2 % | 0.01 % | Pass |
| Triton X-100 | 0.2 % | 0.01 % | Pass |
| 牛血清白蛋白(BSA) | 200 mg/mL | 10 mg/mL | Pass* |
| dNTPs** | 2 mM | 100 μM | Pass |
| 聚乙二醇 | 40 % | 2 % | Pass |
| 瓊脂糖 | 2 % | 0.1 % | Pass |
【注】：3份dsDNA平行樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別在上述含有特定濃度污染物的條件下（初始濃度進(jìn)行檢測，“Pass"指與沒有污染物的體系相比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果變化范圍<20%。所有樣品用Molecular DevicesGemini XS酶標(biāo)儀在485 nm處激發(fā)，在530 nm處測熒光強(qiáng)度?！?/span>Pass *"指由此條件測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線有少許變動(dòng)。“dNTPs**"指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。
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