簡(jiǎn)要描述:Caspase 8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(綠色)是通過(guò)測(cè)量Caspase 8的活性而用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)的,使(Ac-IETD)2-R110作為熒光指示器來(lái)檢測(cè)caspas-8的活性,通過(guò)caspas-8的切割R110肽產(chǎn)生強(qiáng)綠色熒光,其發(fā)射光在520 nm和530 nm之間,激發(fā)光為480 nm和500 nm之間。這種特性使得試劑盒能適合于FITC濾光器。
產(chǎn)品分類
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品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | AC12L064 |
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規(guī)格 | 200T | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 通過(guò)測(cè)量Caspase 8的活性而用于細(xì)胞凋亡檢測(cè) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
Caspase 8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是通過(guò)測(cè)量Caspase 8的活性而用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)的。Caspase 8 是一種Caspase蛋白,CASP8基因所編碼。在神經(jīng)元變性疾病中,例如亨廷頓綜合癥,caspase 8扮演著重要角色。Caspase 8已被證明具有底物選擇性,其肽基序?yàn)镮le-Glu-Thr-Asp (IETD)。該試劑盒使(Ac-IETD)2-R110作為熒光指示器來(lái)檢測(cè)caspas-8的活性。通過(guò)caspas-8的切割R110肽產(chǎn)生強(qiáng)綠色熒光,其發(fā)射光在520 nm和530 nm之間,激發(fā)光為480 nm和500 nm之間。這種特性使得試劑盒能適合于FITC濾光器。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
本試劑盒提供所有必需組分和合適的操作流程。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定,快速且適應(yīng)高通量篩選。它不僅能夠定量凋亡細(xì)胞中caspas-8的活性還能篩選caspas-8的抑制劑。
技術(shù)資料
1.Ex(nm):500
2.Em(nm):522
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
Caspase 8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(綠色) | AC12L064 | 200T | 2980 |
產(chǎn)品組分
產(chǎn)品組分 | 規(guī)格 |
A: Caspase 3/7 Substrate (200X Stock Solution) | 50ul*2 |
B: Assay Buffer | 20ml |
實(shí)驗(yàn)方案
1.用測(cè)試化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制備細(xì)胞。
2.加入等體積的Caspase 8工作溶液(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)。
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)。
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490/525 nm處的熒光增加(截止= 515 nm)。
5.將50μLCaspase8底物(組分A)加入10mL測(cè)定緩沖液(組分B)中并充分混合以制備Caspase 8工作溶液(溶液需避光保存)。
【注】:Caspasae 8工作液不穩(wěn)定,請(qǐng)及時(shí)使用。
操作步驟
1.通過(guò)將10μL/孔的10X測(cè)試化合物(96孔板)或5μL/孔的5X測(cè)試化合物(384孔板)加入PBS或所需緩沖液中來(lái)處理細(xì)胞。對(duì)于空白孔(沒(méi)有細(xì)胞的培養(yǎng)基),加入相同量的化合物緩沖液。
2.將細(xì)胞板在5%CO 2,37℃培養(yǎng)箱中孵育所需的一段時(shí)間(對(duì)于用喜樹(shù)堿或星形孢菌素處理的Jurkat細(xì)胞,4-6小時(shí))以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
3.加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Caspase 8工作溶液。
4.將板在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí),避光。
【注】:如果需要,在室溫下加入Caspase 8工作溶液10分鐘前,向選定的樣品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑,以確認(rèn)對(duì)caspase 8樣活性的抑制作用。
5.以800rpm離心細(xì)胞板(特別是對(duì)于非貼壁細(xì)胞)2分鐘(制動(dòng)關(guān)閉)。
6.用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 525nm(截止= 515nm)下監(jiān)測(cè)熒光增加。
數(shù)據(jù)分析
圖1.使用Cell Meter Caspase 8活性細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒檢測(cè)Jurkat細(xì)胞中的caspase 8活性
在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的一天以200,000個(gè)細(xì)胞/90μL/孔接種Jurkat細(xì)胞。 用或不用20μM喜樹(shù)堿處理細(xì)胞4小時(shí)。 加入半胱天冬酶8工作溶液(100μL/孔)并在室溫下溫育1小時(shí)。 使用FlexStation 酶標(biāo)儀(Molecular Devices)在Ex / Em = 490 / 525nm(截止值= 515nm)下測(cè)量熒光強(qiáng)度。
注意事項(xiàng)
該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
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